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别隐品碱(485-91-6)、阿片碱在博落回不同部位的含量!

2020-12-17


博落回Macleayacordata(Willd)R.Br.为罂粟科博落回属植物。博落回含有多种异喹啉类生物碱,包括原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱等活性成分[1]。博落回始载于《本草拾遗》,别号有号筒草、山大筒等,为多年生草本,在我国分布于安徽、江苏、湖北、湖南、四川等省区。博落回具有消肿、解毒、杀虫的功能,用于疔毒脓肿,恶疮溃疡,烫伤,顽癣等。现代药理研究表明博落回具有抗菌、抗肿瘤、杀虫杀蛆、止咳平喘、镇痛、改善肝功能、增强机体免疫力等作用[2]。

已有文献报道采用HPLC法测定博落回果实中血根碱和白屈菜红碱的含量[3]。本实验采用HPLC法同时测定博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱的含量,为扩大以获得原阿片碱、别隐品碱为目的的博落回的中药材市场提供参考。


1实验材料

1.1仪器

SHIMADZU20A高效液相色谱仪,LC-solution工作站;TP300超声清洗仪(昆明市超声仪器有限公司)。

1.2试药

原阿片碱(中国药品生物制品鉴定所,批号110853-200402);别隐品碱(SIGMA,批号S450987)。乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯。博落回样品采自湖南美可达生物资源有限公司种植园。

别隐品碱图谱

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为Luna-C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH3.5)-乙腈(78∶22);流速:0.8mL/min;柱温:25℃;进样量:5μL;检测波长:284nm。

2.2对照品溶液的制备

精密称取原阿片碱对照品5.24mg,别隐品碱对照品8.62mg,置于同一50mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。

2.3供试品溶液的制备

取干燥的博落回不同部位样品1.00g,置于200mL圆底烧瓶中,加1%HCl水溶液-甲醇(1:1)200mL,称定质量,超声1h,放冷,再称定质量,用1%HCl水溶液-甲醇(1∶1)补足损失的质量,摇匀,经0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.4线性范围考察

精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0mL,分别置于10mL量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密量取5μL进行分析。以对照品的浓度(μg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得回归方程。原阿片碱:Y=13790X-40090,r=0.9994,线性范围:4.2~52μg/mL;别隐品碱:Y=8306X-2800,r=0.9999,线性范围:6.9~86μg/mL。结果表明,原阿片碱、别隐品碱浓度与峰面积线性关系良好。

2.5精密度试验

取同一对照品溶液,重复进样6次,测定原阿片碱、别隐品碱峰面积,结果原阿片碱、别隐品碱峰面积的RSD分别为0.2%、0.3%。

2.6稳定性试验

取供试品溶液,自溶液配制后分别在0、2、4、8、12、24h各进10μL,测得原阿片碱、别隐品碱峰面积的RSD分别为0.9%、0.6%。结果表明该样品溶液在24h内稳定。

2.7重复性试验

取同一部位博落回药材(叶片,采集时间为2009年8月)粉末,按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液,进样测定原阿片碱、别隐品碱的含量平均值为1.04%、0.68%,RSD分别为0.9%、0.6%。2.8加样回收率试验精密称取6份原阿片碱含量为1.04%、别隐品碱含量为0.68%的博落回叶片样品各0.5g,分别精密加入原阿片碱、别隐品碱对照品5.00mg和3.50mg。按“2.3”项下方法操作,在上述色谱条件下进行测定,计算原阿片碱回收率为99.2%,RSD为1.8%;

别隐品碱回收率为99.4%,RSD为0.9%。

2.9样品测定

对不同部位的博落回样品按“2.3”项下制成供试品溶液,进行HPLC测定,记录原阿片碱、别隐品碱峰面积,按标准曲线法计算2个生物碱含量,每组重复测3次】。

 

通过对原阿片碱、别隐品碱对照品溶液在200~800nm波长扫描,结果显示原阿片碱、别隐品碱在284、288nm波长处有最大吸收,然后进一步分析比较这2个波长下的图谱,发现检测波长为284nm时,原阿片碱和别隐品碱都有较大吸收,且基线较为平稳,所以选择284nm为检测波长。

通过对比多种流动相,如甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH3.5)流动相。结果表明,用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH3.5)做流动相,基线稳定,分离度好,峰形对称,确定用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺缓冲溶液(pH3.5)为流动相。本实验建立了同时测定博落回不同部位中原阿片碱、别隐品碱的定量检测方法,该方法简便、准确、灵敏度高。结果表明,博落回不同部位原阿片碱、别隐品碱含量有差异;其中博落回叶片中原阿片碱含量最高,根中别隐品碱含量最高,两种生物碱之和在博落回不同部位中含量为:根>果实>叶>茎。