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蟾酥对照品成分检测方法!

2020-12-17


中蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍,洗净,挤取耳后腺及皮肤腺的白色浆液,加工,干燥。性味辛温 。归心经。主要功能为解毒、止痛、开窍醒神。用于痈疽疔疮,咽喉肿痛,中暑吐泻,腹痛神昏,手术麻醉,以及强心、升压、兴奋呼吸、抗肿瘤等。由于蟾酥具有较强的生理活性,同时其毒性也较大,因此,对蟾酥及其制剂需要严格控制质量。

蟾酥对照品

化学成分及性质

蟾酥为蟾蜍耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液,经加工干燥而成,化学成分复杂,主要含蟾蜍甾二烯类,强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类。蟾蜍甾二烯类又分为游离型和结合型。其游离型称蟾毒配基,其结合型多为脂溶性的蟾酥毒素类、蟾酥配基类和精氨酸等结合的酯类。这类成分往往在干燥加工或提取过程中分解为蟾酥配基类。蟾酥中含有脂蟾毒配基、 华蟾毒精、 蟾毒灵、 蟾毒它灵、 远华蟾毒精及日蟾毒它灵等多种成分。

蟾酥及其制剂的含量测定方法很多,如分光光度法、薄层扫描法、差示光度法、高效液相色谱法和气相色谱法等。

分光光度法

称取蟾酥适量,置索氏提取器中,加氯仿回流提取 5 小时,挥干氯仿。残渣分为二份,一份以乙醇溶解定容;另一份加 4% NaOH 溶液 2mL,并用乙醇稀释至刻度,摇匀,室温下放置 30 分钟后于 360nm 分别测定两份溶液的吸收度,回归方程计算含量。

取蟾酥约 0.5g,于 80℃干燥 2 小时,研成细粉,精密称定,加海砂 5g,混匀,置索氏提取器中,加氯仿适量,提取4 小时,回收氯仿,残留物加乙醇适量使溶解,滤过,滤液移至 100mL 量瓶中,用少量乙醇分数次洗涤滤器,洗涤液并入量瓶中并加乙醇稀释至刻度,摇匀,精密量取 lmL置 25mL 量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,在 299nm 波长处测定吸收度,按脂蟾毒配基 (C24H3204) 的吸收系数 E ;兰为 154 计算,即得。

薄层扫描法

薄层扫描法应用较广,常用硅胶 G 板,丙酮 - 氯仿 -环己烷展开系统,在 λS300nm,λR340nm 处进行反射式锯齿扫描。可测定脂蟾毒配基、华蟾毒精、蟾毒灵、蟾毒它灵、远华蟾毒精及日蟾毒它灵等多种成分。

气相色谱法

用气相色谱法测定蟾酥及其制剂的样品需进行适当的预处理,如将样品提取液先经过柱层析或薄层层析后,方可进行气相色谱测定,采用 FID 检测器,内标法或外标法定量。

高效液相色谱法

蟾酥中含有的蟾蜍笛二烯类、强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类成分,都具有紫外吸收,可用高效液相色谱法测定。如《中国药典》2005 年版蟾酥中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基就是用高效液相色谱法测定。